2020年35卷5期
Dengue virus (DENV) is an important mosquito borne-flavivirus that causes dengue fever and in some heterotypic secondary infections, haemorrhagic symptoms that might risk the lives of patients. These epidemiologic observations were made 50 years ago, suggest that the previous immune response to DENV could be involved in the pathology of the disease. Nowadays, it has been shown that the DENV specific antibodies are participating through a mechanism called antibody-dependent enhancement (ADE). The cellular bases of how these antibodies are generated in secondary lymphoid organs remain largely unexplored. In this issue, Marcial-Juárez et al., demonstrated massive B cell proliferation inside regional lymph node follicles after cutaneous DENV immunization in mice and, contrastingly, a very poor T cell response. The cover image shows a panoramic view of a lymph node, with intense recruitment of tingle-body macrophages (TBMs, green) inside DENV-induced germinal centers (IgD [red]-negative areas in the cortex) to remove the large number of apoptotic bodies present in regional lymph node follicles. Please see 575-587 pages for details.
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A Comprehensive Review on Human Aichi Virus
2020, 35(5): 501 doi: 10.1007/s12250-020-00222-5
收稿日期: 2019-09-21
录用日期: 2020-02-28
出版日期: 2020-04-27
Although norovirus, rotavirus, adenovirus and Astrovirus are considered the most important viral agents transmitted by food and water, in recent years other viruses, such as Aichi virus (AiV), have emerged as responsible for gastroenteritis outbreaks associated with different foods. AiV belongs to the genus Kobuvirus of the family Picornaviridae. It is a virus with icosahedral morphology that presents a single stranded RNA genome with positive sense (8280 nucleotides) and a poly (A) chain. AiV was first detected from clinical samples and in recent years has been involved in acute gastroenteritis outbreaks from different world regions. Furthermore, several studies conducted in Japan, Germany, France, Tunisia and Spain showed a high prevalence of AiV antibodies in adults (between 80% and 99%), which is indicative of a large exposure to this virus. The aim of this review is to bring together all the discovered information about the emerging pathogen human Aichi virus (AiV), discussing the possibles routes of transmission, new detection techniques and future research. Although AiV is responsible for a low percentage of gastroenteritis outbreaks, the high seroprevalence shown by human populations indicates an evident role as an enteric agent. The low percentage of AiV detection could be explained by the fact that the pathogen is more associated to subclinical infections. Further studies will be needed to clarify the real impact of AiV in human health and its importance as a causative gastroenteritis agent worldwide.
一株新型禽8a型腺病毒流行毒株的分离与鉴定
2020, 35(5): 517 doi: 10.1007/s12250-019-00172-7
收稿日期: 2019-06-04
录用日期: 2019-08-05
出版日期: 2020-12-02
自2012年以来，包涵体肝炎的临床病例呈上升趋势，给我国养禽业造成了严重的经济损失。本研究从患有包涵体肝炎的鸡群中分离到一株禽腺病毒CH/GDLZ/201801株，然后进行了全基因组序列分析和致病性研究。透射电镜可以观察到典型的二十面体病毒结构。FAdV-8a病毒CH/GDLZ/201801株全基因组大小为44,329 bp，G+C含量为58%。全基因组进化树分析表明该毒株属于FAdV-8a（FAdV-E）。重组分析和进化树分析结果表明，该分离株为FAdV-8a 和FAdV-8b的重组毒株。致病性试验结果表明，有3只试验鸡出现任何临床症状，且于攻毒后第7天有1只试验鸡死亡，死亡率为5%。剖检观察和病理显微均能观察到肝脏病变，且在电镜下能观察到大量腺病毒粒子。总之，我们研究了FAdV-8a病毒CH/GDLZ/201801株的基因组特征及致病性。这为进一步研究该病毒的致病机理和疫苗研究打下坚实基础。
B型猪腺病毒的第一次全基因组解析及其淋巴嗜性和特殊起源的探究
2020, 35(5): 528 doi: 10.1007/s12250-020-00210-9
收稿日期: 2019-12-05
录用日期: 2020-02-04
出版日期: 2020-03-31
猪腺病毒（PAdV）可分为PAdV-A、PAdV-B和PAdV-C三种，其中PAdV-A和PAdV-C的基因组已被完全解析，但PAdV-B的基因组尚未完全测序，且其流行病学尚不清楚。在我们的研究中，通过病毒宏基因组分析和通用PCR鉴定了一种新的PAdV-B株，命名为PAdV-B-HNU1。PAdV-B-HNU1的基因组长度为31743bp，与加利福尼亚海狮腺病毒1（C.sea lion AdV-1）的基因组高度相似，它含有典型的哺乳动物腺病毒结构，但在羧基末端有一些独特的区域。PAdV-B-HNU1有一个dUTPase编码区，与海狮AdV-1的dUTPase同源；PAdV-B-HNU1编码的纤突蛋白与动物galectin 4和9同源；而这两个基因与其它哺乳动物腺病毒均不聚类。然而，PAdV-B-HNU1（55%）和C.sea lion AdV-1（36%）的GC含量差异表明了它们有不同的演化路径。进一步的流行病学研究显示，猪淋巴标本中PAdV-B-HNU1的阳性率很高（51.7%），相较而言，咽拭子和肛拭子中PAdV-B-HNU1的阳性率分别为10.2%和16.1%。综上所述，本研究鉴定了一个具有独特演化起源的淋巴型PAdV-B的新型代表基因组，该结果有助于PAdV的分类和致病性研究。
老挝受HIV CRF01_AE和新鉴定的CRF97_01B的影响
2020, 35(5): 538 doi: 10.1007/s12250-020-00215-4
收稿日期: 2019-12-02
录用日期: 2020-02-18
出版日期: 2020-03-30
老挝是东南亚唯一一个内陆国家。虽然它与该地区受HIV冲击最为严重的泰国、缅甸和柬埔寨接壤，但它几十年来一直被认为是一个低HIV流行的国家。为了了解老挝的HIV流行现状，本研究对2011年至2012年老挝首都万象某医院的2851名病人进行了回顾性研究。使用PCR的方法从该人群的血液DNA中扩增HIV gag基因片段，确定阳性样本。扩增HIV近乎全长基因组后进行系统进化和系统地理学分析。69名病人HIV前病毒DNA阳性，阳性率为2.4%（69/2851）。在扩增获得的61条HIV全长基因组中，56条（91.8%）为CRF01_AE，其余5条序列被鉴定为新的流行重组型——CRF97_01B。CRF97_01B以CRF01_AE为骨架，在gag-pol区域存在B亚型的插入。系统地理学结果显示，老挝流行的HIV CRF01_AE起源于泰国，且存在多条传播路径。以上结果提示，老挝受到HIV的影响可能比我们一直认为的要严重。为了避免老挝重走周边国家的老路，及时的干预措施和大量的流行病学研究显得迫在眉睫。
中国H5亚型高致病性禽流感病毒系统地理学分析
2020, 35(5): 548 doi: 10.1007/s12250-020-00193-7
收稿日期: 2019-05-26
录用日期: 2020-12-17
出版日期: 2020-05-08
H5亚型高致病性禽流感病毒对养殖业发展、野鸟生态和人类健康构成了极大的威胁。中国是非常重要的H5亚型高致病性禽流感病毒流行地区，这个地区的病毒迁徙网络还有待深入的研究。为了更好理解不同宿主在H5亚型病毒传播进化中发挥的作用，我们对2000-2018年不同宿主体内H5亚型高致病性禽流感病毒HA基因进行分子遗传进化分析。为了推断时空传播动态进化过程，我们使用灵活的贝叶斯统计框架，连续时间马尔科夫链模拟病毒空间扩散过程。对H5病毒进行贝叶斯系统地理分析，发现家禽和野鸟中的H5亚型高致病性禽流感病毒首次分离于广东省。在家禽源H5亚型高致病性禽流感病毒的扩散和迁徙网络中，广东省，湖南省、江苏和上海是病毒传播中心。在野鸟源H5亚型高致病性禽流感病毒的扩散和迁徙网络中，河南、上海、香港、内蒙古是病毒传播中心。结果表明家禽和野鸟中H5高致病禽流感病毒的进化动力学是不同的。本研究的发现将加深对H5亚型高致病性禽流感病毒在中国传播和扩散的理解和认识。
2016–2019年，武汉地区季节性流感病毒的分子流行病学调查及其疫苗有效性分析
2020, 35(5): 556 doi: 10.1007/s12250-020-00225-2
收稿日期: 2019-12-15
录用日期: 2020-03-07
出版日期: 2020-05-11
流感病毒每年在世界范围内都会造成较高的发病率和死亡率，因此对公共卫生安全构成了严重的威胁。湖北省武汉市是中国重要的交通枢纽之一，其人口密集、气候适宜的特征对于流感病毒的暴发存在重大的安全隐患。为了进一步了解武汉地区季节性流感病毒的流行特征，我们在2016–2019年期间共采集44,738份咽拭子，其中A型流感病毒阳性率为15.5%，B型流感病毒阳性率为6.1%，混合感染占0.3%。通过对2016年6月至2019年5月期间每个月流感病毒感染情况的密切观察，我们发现与以往流感病毒季节性传播模式不同，在2017–2018和2018–2019年的冬天分别仅出现一个感染高峰期，这些结果也进一步说明了武汉地区季节性流感病毒传播模式的复杂性。另外，我们发现季节性流感病毒感染的主要人群集中在5–14岁，他们的活动地点在学校，这也说明学校是流感病毒暴发的重要场所，需要引起人们的高度重视。系统进化分析发现采样期间两种亚型的A(H3N2) 在武汉地区共同传播，并且型别转换出现在2018年。更为重要的是，在评估疫苗有效性时发现A型流感病毒的疫苗株似乎与当年的流行株匹配度较差，尤其是A(H3N2)。因此，准确预测季节性流感病毒的传播对于有效疫苗的研发至关重要。综上所述，这项研究详细的描述了2016–2019年期间武汉市季节性流感的流行特征，为后期疫苗的更新提供了理论依据。
Effect of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-γ Coactivator-1 Alpha Variants on Spontaneous Clearance and Fibrosis Progression during Hepatitis C Virus Infection in Moroccan Patients
2020, 35(5): 566 doi: 10.1007/s12250-020-00220-7
收稿日期: 2019-10-04
录用日期: 2020-02-08
出版日期: 2020-04-15
Hepatitis C virus (HCV) is still one of the main causes of liver disease worldwide. Metabolic disorders, including non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), induced by HCV have been shown to accelerate the progression of fibrosis to cirrhosis and to increase the risk of hepatocellular carcinoma. An optimal peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha (PPARGC1A) activity is crucial to prevent NAFLD installation. The present study aims to investigate the associations between two common PPARGC1A polymorphisms (rs8192678 and rs12640088) and the outcomes of HCV infection in a North African context. A series of 592 consecutive Moroccan subjects, including 292 patients with chronic hepatitis C (CHC), 100 resolvers and 200 healthy controls were genotyped using a TaqMan allelic discrimination assay. PPARGC1A variations at rs8192678 and rs12640088 were not associated with spontaneous clearance of HCV infection (adjusted ORs = 0.76 and 0.79 respectively, P > 0.05, for both). Furthermore, multivariable logistic regression analysis showed that both SNPs were not associated with fibrosis progression (OR = 0.71; 95% CI 0.20–2.49; P = 0.739; OR = 1.28; 95% CI 0.25–6.54; P = 0.512, respectively). We conclude that, in the genetic context of South Mediterranean patients, rs8192678 and rs12640088 polymorphisms of PPARGC1A are neither associated with spontaneous clearance nor with disease progression in individuals infected with HCV.
Cutaneous Dengue Virus Inoculation Triggers Strong B Cell Reactions but Contrastingly Poor T Cell Responses
2020, 35(5): 575 doi: 10.1007/s12250-020-00213-6
收稿日期: 2019-10-16
录用日期: 2019-12-24
出版日期: 2020-04-20
Dengue is a global health problem without current specific treatment nor safe vaccines available. While severe dengue is related to pre-existing non-neutralizing dengue virus (DENV) antibodies, the role of T cells in protection or pathology is unclear. Using cutaneous DENV infection in immunocompetent mice we previously showed the generation of PNA+ germinal centers (GCs), now we assessed the activation and proliferation of B and T cells in draining lymph nodes (DLNs). We found a drastic remodelling of DLN compartments from 7 to 14 days post-infection (dpi) with greatly enlarged B cell follicles, occupying almost half of the DLN area compared to ~24% in naïve conditions. Enormous clusters of proliferating (Ki-67+) cells inside B follicles were found 14 dpi, representing ~33% of B cells in DLNs but only ~2% in non-infected mice. Inside GCs, we noticed an important recruitment of tingle body macrophages removing apoptotic cells. In contrast, the percentage of paracortex area and total T cells decreased by 14–16 dpi, compared to controls. Scattered randomly distributed Ki-67+ T cells were found, similar to non-infected mice. CD69 expression by CD4+ and CD8+ T cells was minor, while it was remarkable in B cells, representing 1764.7% of change from basal levels 3 dpi. The apparent lack of T cell responses cannot be attributed to apoptosis since no significant differences were observed compared to non-infected mice. This study shows massive B cell activation and proliferation in DLNs upon DENV infection. In contrast, we found very poor, almost absent CD4+ and CD8+ T cell responses.
在发热伴血小板减少综合征病毒感染的急性期存在CD56dimCD16+NK细胞的耗竭及其激活——在急性SFTSV感染患者中存在CD56dimCD16+NK细胞的紊乱
2020, 35(5): 588 doi: 10.1007/s12250-020-00224-3
收稿日期: 2019-08-11
录用日期: 2020-02-28
出版日期: 2020-05-19
发热伴血小板减少综合征（SFTS）是一种新型传染病，死亡率高（12％–30％）。新型布尼亚病毒（SFTSV）引发严重疾病的机制目前尚不清楚。为了评估SFTS患者中NK细胞亚群的表型和功能特征，我们动态采集了29名SFTS患者从入院至康复期的血标本。通过流式细胞仪分析外周血液中NK细胞亚群的表型和功能特征。然后，在入院时评估所有患者（15例轻症，14例重症）中NK细胞亚群的频率与疾病严重程度（SFTSI）之间的相关性。在SFTSV感染早期，CD56dimCD16+NK细胞的频率明显降低，且与疾病严重程度呈负相关。此外，与健康对照相比，SFTSV感染的急性期CD56dimCD16+NK细胞中Ki-67和颗粒酶B的表达水平较高，NKG2A的表达水平较低。另外，9例重症SFTS患者急性期中CD56dimNK细胞的效应功能较恢复期有所增加。同时，在SFTSV感染早期，白介素(IL)-15、干扰素(IFN)-α、IL-18和IFN-γ的分泌均显着增加。简而言之，在SFTSV感染患者中尽管存在CD56dimCD16+NK细胞的耗竭，仍然可以观察到CD56dimCD16+NK细胞的活化和功能增强，这表明它们参与了SFTSV早期感染的防御反应。
肠道病毒71型VP4蛋白豆蔻酰化对感染性及与膜结构的相互作用具有重要影响
2020, 35(5): 599 doi: 10.1007/s12250-020-00226-1
收稿日期: 2019-12-12
录用日期: 2020-03-03
出版日期: 2020-05-12
肠道病毒71型(EV71) VP4蛋白在被翻译的同时，在其氨基末端甘氨酸残基上与豆蔻酸相连称之为豆蔻酰化。然而，在EV71生命周期中，豆蔻酰化的作用仍是未知的。为了研究这一问题，我们在EV71 VP4上引入了Gly-to-Ala（G2A）突变，制备豆蔻酰化缺失型的活病毒和具有报告基因（荧光素酶）假病毒的质粒。将EV71-G2A基因组转染到细胞内后发现，豆蔻酰化缺失并不影响病毒蛋白的表达和病毒形态，但对病毒感染性有显著影响。此外，与野生型病毒相比，豆蔻酰化缺失型的具有报告基因（荧光素酶）假病毒感染细胞的荧光素酶活性和病毒基因组RNA明显降低；然而，在豆蔻酰化缺失型活病毒感染的细胞中，未检测到细胞病变效应（CPE）和病毒衣壳蛋白。此外，虽然在感染的第二代盲传细胞中检测到豆蔻酰化缺失型病毒RNA和蛋白，但与野生型病毒相比，其量明显降低。豆蔻酰化缺失型病毒中，基因组RNA和负链病毒RNA的复制均被阻断，这表明豆蔻酰化缺失会影响病毒基因组RNA从衣壳向细胞质的释放。此外，VP4上豆蔻酰化的缺失改变了VP4与绿色荧光（GFP）融合蛋白的分布，使其从膜结构部分消失。最后，脂质体渗漏实验表明EV71的豆蔻酰化介导了模型膜的通透性。因此，VP4氨基端豆蔻酰化是EV71感染和壳膜结构相互作用的关键。本研究为EV71型感染的分子机制和抗病毒药物设计的潜在分子靶点提供了新的分子机制。
不同羊瘙痒因子感染的多种品系实验小鼠脑组织中γ干扰素诱导蛋白10、角质细胞趋化因子及巨噬细胞集落刺激因子含量明显升高
2020, 35(5): 614 doi: 10.1007/s12250-020-00216-3
收稿日期: 2019-09-17
录用日期: 2019-11-27
出版日期: 2020-04-20
朊病毒病中枢神经系统常观察到炎症细胞的激活和多种细胞因子的上调。为评估朊病毒感染过程中鲜有报道的脑组织细胞因子的潜在变化，本研究首先利用Luminex方法对不同羊瘙痒因子感染的小鼠脑组织中17种细胞因子的含量进行筛选。在不同羊瘙痒因子感染的多种品系实验小鼠脑组织裂解物中，多次检出高含量的γ干扰素诱导蛋白10（IP10）、角质细胞趋化因子（KC）和巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）。随后，我们针对这三种异常升高的细胞因子分别进行特异性ELISA及免疫组织化学验证，结果发现三种细胞因子蛋白含量均特异性升高。同时，我们利用特异性荧光定量PCR以及IP10特异性微滴式数字PCR方法分析发现，在羊瘙痒因子感染小鼠脑组织中IP10、M-CSF和KC的mRNA水平均上调。进一步，我们对朊病毒感染不同时间点的小鼠脑组织进行动态分析，发现三种细胞因子（尤其是IP10）的蛋白含量与感染时间呈依赖性增加。此外，我们还发现在散发性克-雅病（sCJD）患者组中（45例），脑脊液IP10的蛋白水平较诊断为非朊病毒病患者明显增加。我们的这些数据丰富了朊病毒感染和朊病毒病发展过程中炎症反应特征。
以登革病毒临床分离株建立登革感染的小鼠模型
2020, 35(5): 626 doi: 10.1007/s12250-020-00229-y
收稿日期: 2019-11-09
录用日期: 2020-03-11
出版日期: 2020-05-25
登革病毒是一种在热带和亚热带地区广泛流行的单链RNA病毒，经由蚊虫传播。登革病毒的感染可在人体内造成登革热、登革出血热以及登革休克综合征等疾病。在全球范围内每年约3.9亿人被登革病毒感染，对全球的公共卫生和地区经济都形成了巨大的威胁和负担。迄今为止尚无针对登革病毒的抗病毒药物，全球唯一上市的登革病毒疫苗也因其潜在的严重负作用而备受争议。而小鼠感染模型应用的局限性一直是登革病毒疫苗研发过程中重要的限制因素。尽管前人的研究已建立了多种登革病毒的小鼠感染模型，但只有少数特定的病毒株能够感染部分的免疫缺陷小鼠。在此项研究中，我们利用从临床病毒株中进一步分离纯化得到的病毒变异株，建立了两种小鼠感染模型。在免疫缺陷的AG6小鼠中，我们建立了登革感染的出血和致死模型。在通过抗体阻断了一型干扰素受体的Balb/c小鼠中，我们也成功建立了登革病毒自限性感染的模型。这项研究，不仅提供了新的登革小鼠感染模型，也为研究登革病毒的致病机制提供了有价值的病毒变异株。
杆状病毒表面展示寨卡病毒包膜蛋白对攻毒小鼠的免疫保护作用
2020, 35(5): 637 doi: 10.1007/s12250-020-00238-x
收稿日期: 2019-10-24
录用日期: 2020-04-10
出版日期: 2020-05-29
Zika病毒是世界范围内重要的病原体，可导致严重的神经系统疾病，如胎儿小头症和格林-巴利综合征。目前尚无特异性抗病毒药物和上市的疫苗用于Zika病毒的治疗和预防，由杆状病毒展示系统表达Zika病毒包膜E蛋白的免疫原性研究尚处于空白。本研究利用来源于加利福尼亚核型多角体病毒（AcMNPV）的重组杆状病毒载体表面展示Zika病毒E蛋白并在小鼠模型中评价其免疫原性。首先，将Zika病毒E蛋白两端分别与AcMNPV的信号肽（SP）和穿膜结构域（TM）连接构建重组体EG；将EG免疫Balb/c小鼠可产生Zika病毒特异性抗体，此抗体在体外也能有效中和Zika病毒；而且，重组蛋白EG免疫AG6（IFN-α/β和IFN-γ受体缺陷）小鼠后可抵抗Zika病毒攻毒。总之，本研究发现杆状病毒表达的重组E蛋白易于制备并具有良好的免疫原性，免疫小鼠后可产生中和性抗体并保护AG6 小鼠免于攻毒后的死亡。这为促进疫苗及相关免疫学研究的发展提供了一条可行的方法。
T4-like噬菌体的重组及其作用于浮游态和生物被膜态致病性大肠杆菌的研究
2020, 35(5): 651 doi: 10.1007/s12250-020-00233-2
收稿日期: 2019-10-09
录用日期: 2020-03-10
出版日期: 2020-05-25
由于抗菌疗法的限制，多重耐药大肠杆菌的日益出现引起了全球的关注。噬菌体疗法被认为是治疗多重耐药大肠杆菌感染的一种有希望的替代方法。然而，噬菌体作为一种有前途的抗菌剂，其应用受到宿主范围窄和特异性的限制。本研究通过改变gp37的受体特异性决定区，利用本实验室前期建立的T4-like噬菌体同源重组平台，获得了重组的T4-like噬菌体WGqlae。与亲本噬菌体WG01和QL01相比，重组噬菌体WGqlae可以裂解4种其他的宿主菌。WGqlae与供体噬菌体QL01具有相似的生物学特性，包括热稳定性、pH稳定性、最佳MOI和一步生长曲线。此外，测序结果显示，重组噬菌体WGqlae经过20代传代后，gp37基因稳定遗传。浮游态抑制试验中，WGqlae噬菌体对大肠杆菌DE192和DE205B有明显的抗菌作用。WGqlae处理组的大肠杆菌的OD600nm明显低于对照组(P < 0.01)。此外，噬菌体WGqlae能明显地抑制生物被膜的形成，也能清除部分成熟的生物膜。我们的研究表明，重组噬菌体可能是未来噬菌体疗法应用于对抗浮游态和生物被膜态致病性大肠杆菌时有希望的候选噬菌体。
非洲猪瘟病毒的泛基因组分析
2020, 35(5): 662 doi: 10.1007/s12250-019-00173-6
收稿日期: 2019-09-10
录用日期: 2019-10-17
出版日期: 2019-11-11
非洲猪瘟是一种在家猪和野猪上死亡率极高的急性出血热，其病原是非洲猪瘟病毒。非洲猪瘟病毒的基因组是一个大双链DNA分子，长度约为170~193kbp，编码150~167个开放阅读框。非洲猪瘟病毒分离株的基因组差异被认为是多基因家族（MGF）和p22家族成员的获得或丢失造成的。然而，目前仍不清楚这些基因中哪些是必需的，哪些是非必须的，以及哪些负责进化过程中的普遍性和特异性。因此，我们对公共数据库中的42个非洲猪瘟病毒基因组进行了泛基因组分析，以了解它们的基因组特点。我们鉴定出了301个直系同源簇构成了非洲猪瘟病毒的泛基因组，核心基因组包含102个基因，以及168个基因构成的非必须基因组和31个菌株特异性基因。我们的研究表明，非洲猪瘟病毒的泛基因组呈现一个开放状态，而核心基因组在所有分析菌株中表现保守。
基于溶解曲线分析法鉴别鸭肝炎病毒1型和3型的荧光定量PCR方法的建立及应用
2020, 35(5): 666 doi: 10.1007/s12250-020-00211-8
收稿日期: 2019-10-16
录用日期: 2020-03-03
出版日期: 2020-04-08
由鸭甲型肝炎病毒（Duck hepatitis A virus，DHAV）引起的鸭肝炎是一种雏鸭的急性烈性传染病,呈全球性分布严重威胁养鸭业。本研究开发了一种SYBR Green I实时定量RT-PCR检测方法，使用1对引物扩增并通过扩增产物的熔解曲线分析可同时检测和区分1型和3型DHAV。特异性实验证实针对病毒5'非翻译区（UTR）的引物具有高度特异性，与其他常见鸭病毒病，如鸭星状病毒（DAstV），禽流感病毒（AIV），鸭呼肠孤病毒（DRV），鸭病毒肠炎病毒（DEV）和鸭细小病毒（DPV）均无交叉反应。灵敏性实验证实该方法对1型和3型DHAV的检测限均为100拷贝。使用40个临床样本对比测试发现该方法与常规RT-PCR具有100%的吻合度。结果表明，我们建立了一种针对DHAV的新型荧光定量检测方法，采用1对引物可同时鉴定和区分1型和3型DHAV的感染情况。
39卷第2期 (2024年4月)
ISSN 1674-0769
EISSN 1995-820X
CN 42-1760/Q
主编: 石正丽
影响因子: 5.5*
*源于2022年JCR
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